अल्ट्रासोनिक सेल क्रशर का उपयोग करके सेल विखंडन के माध्यम से क्लोरोफिल निकालने के लिए विशिष्ट चरण

अल्ट्रासोनिक सेल क्रशर गुहिकायन बनाने के लिए तरल में अल्ट्रासाउंड के फैलाव प्रभाव का उपयोग करता है, जिससे तरल में ठोस कण या कोशिका ऊतक टूट जाते हैं।
जैविक उद्योग के विकास ने अल्ट्रासोनिक सेल पल्वराइज़र का उपयोग करने वाले प्रयोगों की आवश्यकताओं को बढ़ा दिया है, जैसे कि नमूना तापमान को मापना और नियंत्रित करना, कम तापमान वाले शीतलन नमूनों और पूरी मशीन के खुफिया स्तर में सुधार करना, इत्यादि।
अल्ट्रासोनिक सेल क्रशर का उपयोग करके अल्ट्रासोनिक सेल क्रशिंग के माध्यम से क्लोरोफिल निकालने के विशिष्ट चरण:
1. पानी के नमूने को सेंट्रीफ्यूज करें या फ़िल्टर करें और सक्शन फ़िल्टर पर एक एसीटेट फाइबर फ़िल्टर झिल्ली स्थापित करें। निस्पंदन के लिए पानी के नमूने की मात्रात्मक मात्रा डालें, और निस्पंदन के दौरान नकारात्मक दबाव बहुत अधिक (लगभग 50kPa) नहीं होना चाहिए। पानी का नमूना लेने के बाद, फ़िल्टर झिल्ली पर नमी को कम करने के लिए 1-2 मिनट तक नमूना लेना जारी रखें। यदि 1-2 दिनों के लिए अल्पकालिक भंडारण की आवश्यकता है, तो इसे जमने के लिए नियमित रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जा सकता है। यदि दीर्घकालिक भंडारण (30 दिन) की आवश्यकता है, तो इसे कम तापमान (-20 डिग्री) वाले रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाना चाहिए।
2. फाइटोप्लांकटन युक्त फिल्टर झिल्ली को बाहर निकालें और इसे रेफ्रिजरेटर में कम तापमान पर 6-8 घंटों के लिए सुखाएं। इसे कैंची से छोटे-छोटे टुकड़ों में काट लें और 5ml या 10ml सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में रखें। टुकड़ों को तरल स्तर से नीचे डुबाने के लिए 90% एसीटोन का 3-4 मिलीलीटर मिलाएं। टुकड़ों को एक अल्ट्रासोनिक कंटेनर में रखें और नमूने की कोशिकाओं को तोड़ने के लिए अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग करें। (एकीकृत तरीकों के लिए * विखंडन समय और आवृत्ति की पहचान की सुविधा के लिए अलग-अलग समय और आवृत्तियों पर प्रयोगों की तुलना करना)।
3. अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके कोशिका विखंडन के अधीन नमूने को 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज (3000-4000r/min) का उपयोग करके सेंट्रीफ्यूज करें। सतह पर तैरनेवाला को 5 मिलीलीटर या 10 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डालें। 90% एसीटोन के साथ 5 मि.ली. या 10 मि.ली. घोलें और अच्छी तरह हिलाएँ।
4. सतह पर तैरनेवाला को स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर रखें और क्रमशः 750nm, 663nm, 645nm, और 630nm की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण मान पढ़ने के लिए 1cm ऑप्टिकल पथ वर्णमिति डिश का उपयोग करें। नमूने के अवशोषण को सही करने के लिए रिक्त अवशोषण माप के रूप में 90% एसीटोन का उपयोग करें।